Một chuyến tàu đặc biệt chạy từ Nam Cực vào rừng rậm có thể không còn tồn tại, nguyên nhân là do đường ray xuống cấp. Các loài động vật sợ mất đi phương tiện di chuyển duy nhất cho phép chúng đi lại đã tìm đến Diego để được giúp đỡ tại Go Diego Go! Cuộc giải cứu đường sắt của Diego. Cậu bé sẵn sàng giúp đỡ, lôi kéo bạn thực hiện kế hoạch của mình. Nó liên quan đến việc sửa chữa đường, nhưng trước tiên bạn cần phải đưa tất cả các loài động vật vào xe ngựa. Hành khách đồng ý chỉ đi cùng đồng loại của mình nên có toa riêng cho chim cánh cụt, hươu, gấu, v.v. Khi tất cả các con vật đã được đặt xong, đoàn tàu sẽ bắt đầu hành trình và trước mỗi điểm dừng, bạn phải lắp ráp con đường giống như một câu đố bằng cách rẽ từng đoạn riêng lẻ trong Go Diego Go! Cuộc giải cứu đường sắt của Diego.
